In praematuro tumultus, ob rapidam progressionem, celeri diagnosis suspectorum aegrorum clavis est ad covid-19 praecavendam.Nonnulli probati nuclei deprehensiones acidum regentes brevem progressionem habent, et problemata sunt quae ad confirmationem perficiendam, optimizationem gerentem insufficientem, magnasque differentias inter batches;Problemata variarum laboratoriorum clinicorum in variis aspectibus processus detectionis acidi nucleici possunt etiam subtiliter deprehensionis eventuum acidi nucleici afficere.Hic articulus in clavibus nexus et puncta in SARS-CoV-2 detectionis acidi nucleici intendunt, et problemata falsae negativae et positivae re- lustrationis detectionis acidi nucleici et clinici inconstantiae analysi.

Principia SARS-CoV-2 detectionis acidi nuclei

SARS-CoV-2 est RNA virus cum serie genoma circiter 29 kb cum 10 genes, quae efficaciter 10 servo encode potest.Virus ex RNA et interdum componuntur, et stratum extimum est tunica exterior lipidorum et glycoproteinorum composita.Intus, dapibus capsidis RNA in eo inligat, inde facilem degradabilem RNA custodiens (P1).

P1 Structura Sars-COV-2

Virus cellulas invadunt per receptacula superficiei cellae specificas ut contagionem faciant, et cellulas exercitus ad usum replicant.

Principium detectionis acidi nuclei viralis est RNA viralem per cellam lysatam detegere, ac deinde transpositio-polymerasis catenae reactionis (RT-PCR) deprehendendi, reale tempore fluorescenti transverso (RT-PCR) uti.

Clavis ad detectionis principium est primariis uti et rimatur ad "aequationem" acidi nucleici consequendi, id est, ad inveniendam acidi nuclei sequentiam SARS-CoV-2 diversam ab aliis virus circiter 30,000 basibus (similitudo acidi nucleici ad alios virus) "humilem" aream), primarios designat et speculatorias.

Primarii et speculatoria valde pares cum regione SARS-CoV-2 speciei acidi nucleici, hoc est, proprietas validissima est.Cum realis tempus fluorescentium RT-PCR amplificationis eventum specimen probandi positivum sit, probat SARS-CoV-2 praesens in sample.Vide P2.

P2 Gradus determinatio acidi nucleici SARS-CoV-2 (real-time fluorescent RT-PCR)

Conditiones et requisita laboratorii SARS-CoV-2 detectionis acidi nuclei

Acidum nucleicum probationes laboratoriae optimae sunt ad culturas pressionum negativarum aptissimas, et attendere debent ad pressionem vigilantiam, aerem fluentem custodiendum, et aerosols eliminandum.Acidum nucleicum personas probatio debitas qualitates habere debet, catenae reactionis polymerase pertinentes recipere ac aestimationem reddere.Laboratorium stricte administrandum, ambae in loco, et personas irreligiosas stricte prohibentur introire.In area munda debet ventilari et in loco disincidere.Res in zonis pertinentes positae sunt, mundae et sordidae separatae sunt, ad tempus repositae, loco decontaminatae.Consuetudo disinfection: Chlorum continens disinfectantem solutionem principalium in locis maioribus est, et 75% alcohol pro parvis areis adhiberi potest.Bona via cum aerosols est apertas fenestras pro evacuatione, et aer disinfection etiam per radios ultraviolacas, filtration et aeris disinfection exerceri potest.

Clavis nexus et parametri SARS-CoV-2 determinatio acidi nucleici (real-temporis fluorescentis RT-PCR)

Etsi laboratoria plerumque attendere ad acidum nucleicum "deprehensio", re vera acidum nucleicum "extraction" unum est e clavis gradibus ad bene detectionem, quod intime connectitur cum collectione et repositione exemplorum virus.

In praesenti, exempla maxime respiratoria late adhibita, sicut swabologia nasopharyngea, secunda methodo utuntur, quae solutionem inactivationem (servationis) paratam fundat in solutione acidi nucleici et lysis.Ex altera parte, hoc virus conservationis solutionis virus dapibus denature potest, suam actionem amittere et infectiosiorem non esse, ac salutem in scaena translationis et deprehensionis emendare;e contra, virus directe resilire potest ut acidum nucleicum emittat, acidum nucleicum enzyme corrumpente eliminare et virus praevenire.RNA deponatur.

Virus solutionem sampling paratam in ex solutione lysis extractionis acidi nucleici.Praecipuae partes sunt salia librata, acidum ethylenediaminetetraaceticum chelante agente, guanidine sal (guanidine isothiocyanate, guanidine hydrochloride, etc.), anionica sulphate (dodecane) sodium), cationico surfactante (tetradecyl trimethyl ammonium oxalatum), phenolum, 8-hydroxyquinolinum plura vel plura.In praesentia multae species acidi nuclei extractionis kitarum sunt, et variae acidi nucleici extractio et purgatio reagentia adhibentur.Etiamsi idem acidi nucleici extractio et purgatio gerens adhibeatur, procedendi cuiusque ornamentum extractio diversae sunt.

In praesenti, detectio acidi nuclei ornamentum productorum probatum a Administratione Nationali Medical Products delecti secundum ORF1ab, E et N genes in genome Sars-CoV-2 sunt.Principia deprehensio diversorum productorum plerumque eadem sunt, sed earum primarum ac speculationum rationes diversae sunt.Sunt segmenta singula scopum (ORF1ab), segmenta duplicata (ORF1ab, N vel E), et segmenta trium clypei (ORF1ab, N et E).Discrimen inter detectionem et interpretationem, acidum nucleicum extractionem et systema reactionem realem-temporis fluorescentis RT-PC referre debet ad instructionum ornamentum pertinentes, et commendatur ut utentes stricte sequantur interpretationem methodi in ornamentum instructionum interpretationis specificatae.Communes regiones, primers et sequentia probe ampliata per fluorescentium RT-PCR real-time demonstratum est in P3.

P3 Locus sars-CoV-2 amplicon scopus in genome ac sequentia primariorum et rimarum.

Interpretatio eventus SARS-CoV-2 determinationis acidi nucleici (Real-Time fluorescent RT-PCR)

"Pneumonia Praeventionis et Plan Plan de SARS-CoV-2 Infectio (Secunda Edition)" primum declaravit criteria iudicandi eventus unius amplificationis gene;

1. Nullus Ct vel Ct≥40 est negativus;

2. Ct<37 positivus est;

3. Ct valor 37-40 est area cinerei.Commendatur ut experimentum repetamus.Si effectus reductionis Ct<40 et amplificationis curvae patentes vertices habet, specimen pro positivo iudicatur, alioquin negativum est».

Editio tertia rectore et quartae editionis ductore re- gulas praedictas continuavit.Nihilominus, ob diversa scuta in kits mercatorum adhibita, praefata 3 editio rectoris normas ad clypeos compositiones determinandas non dedit, efferens Instructiones a fabrica praevalebunt.Incipientes ex quinta editione proscriptiones, duo scuta clarificata sunt, praesertim criteria iudicii pro uno scopo qui difficile est iudicare.Hoc est, si laboratorium confirmare vult causam positivam pro SARS-CoV-2 detectionis acidi nucleici, sequentia condiciones 1 of 2 occurrere debent;

(1) Duo scuta SARS-CoV-2 (ORF1ab, N) in eodem exemplo positivi experimenta real-time fluorescent RT-PCR.Si unicum scopo positivum est, re- sampling et rursus probatio requiruntur.Si eventus probatus sunt, Si simplex scopus adhuc affirmativus est, pro positivo iudicatur.

(2) Duo exemplaria realis-temporis fluorescentis RT-PCR demonstraverunt unum scopum positivi simul vel duo exemplaria eiusdem generis unum scopo positivi eventus ostendit, quae pro positivo iudicari possunt.Nihilominus normae etiam inculcant consequentes negativos probati acidi nuclei infectio SARS-CoV-2 excludere non posse.Factores, qui falsas negationes excludi possunt, inter quas pauperes qualitatem (speciminarum respiratoriarum ab oropharynge et aliis partibus), collectione sample nimis diluculo vel sero, Exempla non recte condita, transportata et processit, et ipsum technologiam difficultates habuit (virus variationis, PCR inhibitionis) etc.

Causae negativae falsae in SARS-CoV-2 deprehensio

Notio "falsae negativae" in acidi nucleici probationis quae in praesenti versatur, saepe refertur ad "negationes falsas" in quibus nuclei probati eventus acidi cum manifestationibus clinicis repugnant, id est, indicia clinica et eventus imaginandi valde suspecti sunt de COVID-19, at probationes nucleici semper sunt "negativae" multoties.Centrum Laboratorium Volumen Nationalis Health Commissio "falsa negativa" SARS-CoV-2 test.

(1) Est quaedam vis virus in cellulis infecti.Data exsistentia ostendunt postquam corpus virus inficitur, virus fauces per nares et os intrat, deinde ad trachiam et bronchum, ac deinde alveoli attingit.Infectus experietur incubationem periodi, lenia symptomata, et tunc processus graves symptomata, et diversi gradus morbi.Virus et moles in diversis partibus corporis diversa sunt.

Secundum onus viralis specierum cellularum, cellularum epithelialium alveolarum (tractus respiratorii inferioris)> cellulae epitheliales airway (tractus respiratorii superioris)> fibroblasts, cellulae endotheliales et macrophages, etc.;e typum specimen, lavacrum alveolaris fluidi (eximii) sanguinis excreationis sputum nasopharyngei swab>oropharyngei swab>sanguinis.Praeterea virus etiam in faecibus deprehendi potest.Attamen, considerans commoditatem operandi et acceptionem aegrorum, communis ordo orci sample usus est swab>nasopharyngeal swab>lavage bronchialis fluidi (operatio multiplex) et sputum altum (tusses sicca plerumque, difficilis ad obtinendum).

Itaque quantitas viri in cellulis oropharynx vel nasopharynx nonnullorum aegrorum est parva vel maxime humilis.Si exempla tantum oropharynx vel nasopharynx ad probationem sumantur, acidum nucleicum virale non detectum est.

(2) Nullae cellulae virus continentium in collectione sample collectae sunt, aut acidum nucleicum virale non efficaciter conservatum.

[① Impropria situs collectionis, exempli gratia, cum colligendis swabis oropharyngeis, collectionis profunditas non sufficit, collectae obiectis nasopharyngeae in cavo nasi profunde non colliguntur, etc. Plurimae cellulae collectae possunt esse cellulae liberae virus;

-Sampling swabs male utitur.Exempli gratia, fibrae syntheticae ut PE fibra, polyester fibra et fibra polypropylene commendantur pro materia capitis swab.Fibrae naturales ut bombacio in operatione actuali adhibentur (adsorptiones interdum validae et non facile abluendae) Et fibrae nylon (absorptionis aquae pauperum, ducens ad volumen sampling insufficiens);

③ Rectus usus virus tubuli repositionis, ut abusus polypropylenae vel polyethylenae fistulae plasticae repositae, quae facile acida nucleica absorbebunt (DNA/RNA), ex diminutione retractationis acidi nucleici in solutione reposita.In praxi, commendatur polyethylene-propylene polymerorum plasticorum uti, et nonnullis vasis plasticis specialiter tractatis polypropylenis ad acida nucleica reponenda.]

[① Impropria situs collectionis, exempli gratia, cum colligendis swabis oropharyngeis, collectionis profunditas non sufficit, collectae obiectis nasopharyngeae in cavo nasi profunde non colliguntur, etc. Plurimae cellulae collectae possunt esse cellulae liberae virus;

-Sampling swabs male utitur.Exempli gratia, fibrae syntheticae ut PE fibra, polyester fibra et fibra polypropylene commendantur pro materia capitis swab.Fibrae naturales ut bombacio in operatione actuali adhibentur (adsorptiones interdum validae et non facile abluendae) Et fibrae nylon (absorptionis aquae pauperum, ducens ad volumen sampling insufficiens);

③ Rectus usus virus tubuli repositionis, ut abusus polypropylenae vel polyethylenae fistulae plasticae repositae, quae facile acida nucleica absorbebunt (DNA/RNA), ex diminutione retractationis acidi nucleici in solutione reposita.In praxi, commendatur polyethylene-propylene polymerorum plasticorum uti, et nonnullis vasis plasticis specialiter tractatis polypropylenis ad acida nucleica reponenda.]

(4) Operatio clinica laboratorium non normatum est.Exemplaria translationis et repositionis condiciones, normae operandi laboratoriorum clinicorum, interpretationis et qualitatis effectae gubernationis sunt factores praecipui ut accurationem et fidem testium proventuum curent.Secundum eventus qualitatem externae aestimationis ab Fusce Laboratory Centro Nationalis Commissionis Health die 16-24, 2020, ex 844 laboratoriis, qui validos eventus acceperunt, 701 (83.1%) erant idonei, et 143 (16.9%) non erant.Secundum quid, altiore laboratorio condiciones probativae bonae sunt, sed diversae officinae adhuc differentias habent in personas facultates operationis, una-scopum positivi specimen interpretationis facultatis, et qualitas temperantiae.

Quomodo reducere negativam falsam de SARS-CoV-2 detectionis acidi nucleici?

Negationes falsas reducere in deprehensione acidi nuclei optimizari debent a quattuor aspectibus negativis falsas producendi.

(1) Est quaedam vis virus in cellulis infecti.Concentratio viri suspecti in diversis partibus corporis infectis personis diversis temporibus erunt.Si pharyngis non est, fieri potest in lavacro bronchiali fluido vel fece.Si multa exemplaria exempla simul vel in variis morbis progressionis ad probationem gradatim colligi possunt, falsas negativas vitandas proderit.

(2) Cellulae virus continentium colligendae sunt in collectione sample.Haec quaestio magna ex parte solvi potest disciplina exemplorum collectorum roboranda.

(3) Reliable IVD reagentia.Investigationes exercendo in deprehensione perficiendi aestimationem reagentium in ambitu nationali, tractando quaestiones exsistentes, deprehensio reagentium efficientia ulterius emendari et sensibilitas analysi melius emendari potest.

(4) Operatio normae orci laboratorios.In confirmando personas officinarum instituendorum, officinarum qualitatem administrationis continenter emendando, divisiones rationabiles procurans, facultatem curatorum detegendi, minuere potest falsas negativas propter improprias operationes laboratorias.

Rationes re-extentationis positivae de SARS-CoV-2 acidi nuclei experimenti in aegros recreati et exauctorati

"COVID-19 Diagnosis et Tractatio Plan (Trial Septima Editio)" evidenter statuit unam criteria pro aegris curandis et ex hospitali COVID-19 curandis esse quod duo exempla tractus respiratorii continuati experimentum acidum nucleicum negativum habent (saltem 24 horis distantibus), sed perpaucae sunt experimentum acidi nuclei SARS-CoV-2 iterum positivum in aegris exauctoratis ob varias causas fuisse.

(1) SARS-CoV-2 novum virus est.Oportet porro intelligere eius mechanismum pathogenicum, plenam imaginem morbi causati et proprietates morbi curriculi.Ex una igitur parte, aegros missionum curationes firmare et observationes medicinae XIV-diei firmare necesse est.Exsequi sequitur, vigilantia sanitatis et ductu sanitatis ad altiorem intellectum totius rei eventum, progressum et exitum morbi.

(2) Patiens iterum virus infici potest.Academicus Zhong Nanshan dixit: Quia aegros sanari elementorum habent, SARS-CoV-2 elementorum cum iterum invadent eliminari potest.Multae sunt rationes, quae causa aegroti recreati vel ad mutationem virus referri possunt, vel etiam causa probationis laboratoriae.Si virus ipsum est, mutatio SARS-CoV-2 causare potest anticorpum a patiente recepto inefficacem contra virus mutatum efficere.Si aeger iterum virus mutato inficitur, experimentum acidum nucleicum iterum positivum esse potest.

(3) Quod ad officinam probandi modos attinet, unaquaeque methodus probat limites suos habet.Deprehensio acidi nuclei SARS-CoV-2 debetur electioni seriei generum, compositionis reagentium, sensibilitatis methodi et aliarum causarum, quae ducens ad kits exsistentes limites deprehendendi inferiores suos habent.Post curatum aegrum decrescit virus in corpore.Cum onus virale in specimen probandum infra limitem deprehensionis inferiorem est, effectus "negativus" apparebit.Sed hoc eventum non significat virus in corpore penitus evanuisse.virus ut post curationem intermissum est.Resurrectio", perge ad exemplum.Ideo commendatur ut semel in hebdomada intra 2 ad 4 septimanas post missionem recenseatur.

(4) Acidum nucleicum est materia viri geneticae.Virus post curationem antiviralem aegroti occiditur, reliqua autem fragmenta virales RNA adhuc in corpore humano retinentur neque ex toto corpore emittuntur.Aliquando in aliqua re magis retineri potest.Multo tempore, et hoc tempore probatus acidum nucleicum "transiens" positivum erit.Cum extensione recuperationis patientis tempus, postquam fragmenta residua RNA in corpore paulatim deficiunt, effectus acidum nucleicum experimentum negativum vertere potest.

(5) Acidum nucleicum experimentum effectus SARS-CoV-2 tantum probat praesentiam vel absentiam RNA viralis, et actionem viri probare non potest et an virus transmissibile sit.Necesse est probare utrum aegrotus, qui nucleicum acidum positivum habet experimentum denuo fons contagionis iterum fiet.Virum culturae in exemplis clinicis exsequi necesse est et "vivere" virus excipere ut infectiosum sit.

Summarium

In summa, SARS-CoV-2 Acidum nucleicum tentare negationes falsas, affirmativas retest, aliasque condiciones quae cum manifestationibus clinicis repugnant non possunt omnino vitari.In actu protegendo et experiendo, commendatur ut signa clinica, examinatio imaginatio (CT) et experimenta tentamenti (acidi nuclei testium + virus specialium anticorpi test) eventus pro diagnosi comprehensive ne diagnosis et misdiagnosis fallantur.Si eventus probatus inveniantur manifesto repugnare cum manifestationibus clinicis, suadetur ut analysis comprehensiva totius tentationis nexus (specimen collectionis, circulationes et nexus processus) excludere possit SARS-CoV-2 virus primae contagionis, recurrentis contagionis vel cum aliis virus respiratoriis infectios coniunctis, etc. fieri posse.Si condiciones permittunt, suadetur ut exemplaria plus sensitiva colligendi sicut sputum vel liquorem alveolaris ad examen retractandum.

Related Products:

SARS-CoV-2 Nucleic Acidum Detection Kit (Multiplex PCR Fluorescent Probe Methodo)