• facebook
  • linkedin
  • youtube

PCR late amplificationis technologiae acidorum nuclei usus est ac late propter eius sensus et proprietatem adhibetur.Nihilominus, PCR repetitam denaturationem scelerisque requirit et limites freti instrumentis et instrumentis carere non potest, quae applicationem in campo clinico probatio limitat.

Cum primis annis 1990, multa laboratoria ad amplificationem technologiarum temperaturam constantem evolvere inceperunt, quae scelerisque denaturationem non requirit.Nunc ansa mediatae amplificationis technologiae isothermal amplificatae sunt, subductio technologiae amplificationis isothermal reponenda, circulus volvens amplificationem technologiam isothermal, et nuclei acidi sequentis dependentia.Isothermal amplificatio technologiae aliarumque technologiarum. 

LColloquia media isothermal amplificatio

Exaggeratio principii innititur eo quod DNA in aequilibrio dynamico est circiter 65°C.Cum primarius quaevis basi geminata et ad partem complementariam DNA subductis extenditur, alter littus dissociabit et destituta fiet.

Ad hanc temperaturam, DNA primis primis certis utitur ad confidendum in acia obsessio DNA polymerasi ut synthesin subductionis DNA circulatione sui continenter efficiat.

Primum determinatas 6 regiones specificas F3, F2, F1, B1, B2, B3 in scopum gene, ac deinde 4 primarios designant in his 6 regionibus specificis (ut infra in figura ostensum est);

Prioris anterioris interioris (FIP) constat ex F1c et F2.

Interior primarius (BIP) ex B1c et B2 componitur, et TTTT in medio pro spacer ponitur.

Exteriores primarii F3 et B3 respective compositi sunt ex F3 et B3 regiones in scopo gene.

Acidum nucleicum isothermal amplificationis technologiae

In LAMPA reactionis ratio, remissio prioris primi pluries est prioris exterioris.Interior primarius primum cum filo Formulario coniungitur ut filum complementarium componat ut filum a DNA duplici formatur.Postmodum, primarius exterior cum filo Formulario coniungitur ut filum duplicatum DNA formet.Sub actione polymerasi BstDNA, filum complementarium a primario interiore confectum emittitur.Post seriem reactionum, litus complementarium unum DNA filum cum dumbbell compages tandem efficit.

DNA dumbbell compages ipsa unius lineae usus est ut exempli causa ad structuram transeuntem DNA cum fine aperto continenter formant.Primarii interiores et exteriores ducunt structuram caulis transeuntis DNA ut continenter litium obsessio et motus extensio subeant, ac denique multiplices structurae caulis anas cum diversis longitudinibus formant.DNA mixtione.

Acidum nucleicum isothermal amplificatio technology2

Commoda et incommoda amplificationis isothermal mediatae loop

Lucernae commoda:

(1) Maximum amplificationis efficientiam, quae efficaciter ampliare potest 1-10 exemplaria scopo gene intra 1h, et amplificatio efficientiae 10-100 temporum vulgarium PCR.

(2) Motus temporis brevis est, species valida est, nullaque specialis instrumenta requiritur.

DELICTUM LUMEN;

(1) Requisita primariorum praecipue sunt alta.

(2) Ampliatus productus non potest adhiberi ad exquisita et sequenda, sed ad iudicium tantum adhiberi.

(3) Ob nimiam eius sensibilitatem facile est formare aerosols, falsas positivas et effectus experimentorum afficiens.

Strad obsessio amplificatio

Strand obsessio amplificationis (SDA) est amplificatio in vitro isothermal DNA fundatur in reactione enzymatica primum proposita ab American scholari Walker anno 1992 .

Systema fundamentale SDA restrictionem endonucleasem includit, polymerasium DNA cum sublato activitatis obsessione, duo primariorum paria, dNTPs et calcium et magnesium iones et systemata quiddam quiddam.

Principium subductionis amplificationis subnixum est in restrictione endonuclease agnitionis chemica modificatae seriei ad utrumque scopum DNA.Endonucleasus hiatum in acia DNA aperit ad situm recognitionis sui, et DNA polymerasus lacunam 3′ Finis extendit et proximum DNA linum substituit.

Repositae singulae fila DNA cum primers componi possunt et in duplices fila ab DNA polymerase extensa.Hic processus continue iteratur, ut ordo scopum efficienter amplietur.

Acidum nucleicum isothermal amplificatio technology3

Commoda et incommoda subductionis amplificatio technologiae

SDA Commoda:

Efficacia amplificationis alta est, tempus breve est reactionem, species valida est, et nullum speciale instrumentum requiritur.

Defectus SDA:

Producta non sunt uniformes, et quaedam producta simplicia et subductis semper in cyclo SDA producta sunt, et tendentes inevitabiliter occurrent cum ab electrophoresi deprehenduntur.

Rcirculus amplificationis olling

Circulus volvens amplificationem (RCA) proponitur ducendo in methodo describendi DNA ex organismis pathogenicis per circulum volubilem.Indicat usum DNA circularis simplicis subductis sicut exemplum in constanti temperie et speciali DNA polymerasi (ut Phi29) ) Sub actione volvendi circuli DNA synthesin ad amplificationem gene scopo consequendam.

RCA dividi potest in amplificationem et amplificationem exponentialem linearem.Efficacia linearis RCA perveniat ad 105tempora, et efficientia RCA exponentialis perveniat ad 10 .9tempora.

Simplex distinctio, ut in figura infra ostendetur, amplificatio linearis unicus usus 1 primario, amplificatio exponentialis b habet 2 primarios.

Acidum nucleicum isothermal amplificatio technology4

RCA linearis vocatur etiam una primario RCA.Primario ligat DNA circulari et extenditur actione DNA polymerase.Productum est filum unius lineae cum frequentibus serierum repetitarum millium longitudine unius fasciae.

Cum producto lineari RCA semper primori principii connexum sit, facilior fixio signi maiorem utilitatem habet.

Exponentialis RCA, etiam Hyper ramosa amplificatio HRCA (Hyper ramosa RCA), in exponentiali RCA, unus primus ampliat productum RCA, secundus primus hybridizit cum productum RCA et extendit, et postea iam obligatus est ad RCA producti amni primers extendentes litus, et repetunt extensionem et subrogationem ad producendum productum dendriticum RCA.

Acidum nucleicum isothermal amplificatio technology5

Commoda et incommoda circuli nuclei volvendi amplificatio acidi

RCA commoda:

Summus sensus, bona specificatio et facilis operatio.

Defectus RCA:

Quaestionum background deprehensio in signo.Per RCA reactionem, specillum padlock incirculatum et exemplum DNA vel RNA soluti speciminis generare aliqua signa potest. 

Nucleicacid sequentia-fundatur amplificationis

Sequentia acidorum nuclei substructio amplificationis (NASBA) est nova technologia in ratione PCR evoluta.Continua et isothermal amplificatio acidi nuclei est, quae duobus primariis cum T7 sequentia fautoris dirigitur.The technology potest amplificare template RNA ab 109 temporibus circiter 2 horis circiter, quod est 1000 temporibus altior quam conventionalis PCR methodus et apparatum specialem non requirit.

Haec technica ad celeri diagnosi morborum quam primum apparuit adhibita est et multae societates in RNA deprehendendi kits hac methodo usi sunt.

Etsi amplificatio RNA etiam transpositione pcr technologiam uti potest, NASBA sua habet utilitates: exerceri potest sub condiciones temperaturas relative constantes et stabilior et accuratior est quam traditionalis PCR technologiae.

Reactio in 41 gradibus Celsius est et postulat AMV (virus myeloblastosis avian) vicissim transcriptase, RNase H, T7 RNA polymerasium et par primers ad perficiendum.

Processus maxime includit:

Deinceps primarius sequentiam promotoris T7 complementariam continet.Per reactionem, prior primarius ad RNA litus ligat et ab AMV enzyme catalyzatur ut filum duplicatum DNA-RNA formet.

RNase H RNA in hybridarum acia digerit et unico DNA retinet.

Sub actione primarii primi et AMV enzyme, duplex filum DNA continens sequentiam promotoris T7 formatur.

Sub actione T7 RNA polymerase, processus transcriptio perficitur et magna copia scopo RNA producitur.

Acidum nucleicum isothermal amplificatio technology6

NASBA Commoda:

(1) Primario T7 fautor sequentias habet, peregrina autem DNA subductis nullum T7 fautorem consequentiam habet nec ampliari potest, ergo haec technologia altam proprietatem et sensum habet.

(2) NASBA directe incorporat e converso transcriptio processus in amplificationem reactionem, temporis reactionem brevians.

NASBA incommoda:

(1) Reactio partium magis implicata est.

(2) Tria enzymorum genera requiruntur ut altiorem motum faciant.


Post tempus: Aug-06-2021