Ut nova in officina laborat, non est bonum officium plantas positivas protegere e fasciculo plantarum cum humili rate conversionis.Primo, DNA e pluribus exemplis singillatim extrahi oportet, et deinde genes peregrini per PCR deprehendentur.Sed eventus blank et ligamenta saepe cum paucis item interdum, sed discernere impossibile est utrum detectiones fallantur an falsae detectiones..Valdene inops est contra tales processus experimentales et eventus?Noli sollicitare, frater, te docere quomodo plantas transgenicas positivas facile et accurate protegere.

I step

Design deprehensio primers

Gen. endogenosa et gene exogenosa secundum specimen probandum detegendum decernite, et 100-500bp seriem repraesentativam in gene pro primario designandi elige.Boni primarii accurate deprehendendi eventus et tempus deprehendendi breviare possunt (vide appendix pro primers communiter detectio).

Animadverte: Primitores nuper designati opus reactionem condiciones optimizare et cognoscere accurationem, praecisionem et deprehensionem limitem deprehensionis ante magnarum rerum deprehensionem.

Gradus 2

Design experimentum protocol

Imperium positiuum: DNA purgata utere continens fragmenti scopo ut exemplum ut determinet utrum ratio reactionis PCR ac condiciones normales sint.

Negativa / blank potestate: Utere DNA template vel ddH2O quod signum fragmenti non continet ut Formulae ad deprehendendum num fons contaminationis in PCR systematis sit.

Internum reference imperium: primario/proba compositione generum endogenosi exempli explorandi ad perpendendum num Formula PCR deprehendi possit.

Animadverte:

Positivas, negativas/blank potestates et controllata interna ponenda sunt pro singulis experimentis ad valorem eventuum experimentalium perpendendos.

Experimentum praeparationis

Ante utendum, vide an solutio sit aequaliter mixta.Si praecipitatio inveniatur, oportet dissolvi et misceri secundum praeceptum ante usum.2×PCR miscere necesse est ut saepe cum micropipette piperi et mixto misceatur ante usum ad evitandas inaequales distributiones.

Animadverte:

Enchiridion eximito et diligenter perlege et ante experimentum stricte praepara ad exigentias manuales.

Gradus 4

Para PCR reactionem ratio

Iuxta protocollum experimentalem, primers, H2O, et 2×PCR aequaliter misce, centrifugium, et unicuique fistulae reactionis distribue.

Animadverte:

Pro magna-scala vel diuturna probatione, commendatur uti systema reactionis PC enzyme continentis, quae aerosol contaminationem a PCR productorum causatam efficaciter vitare potest.

Gradus 5

Add reactionem template

Direct PCR utens technologia, non opus est taedio nuclei acido nuclei purificationis processus, exemplum specimen intra 10 minutas praeparari potest, et ratio reactionis PCR respondentis addi potest.

Animadverte:

Modus bipertitus deprehensionis effectum melius habet, et productum consecutus ad plures motus deprehendendi adhiberi potest.

5.1: Dirige expansionem foliorum

Secundum magnitudinem picturae in manibus, folium textus cum diametro 2-3mm secare et pone in PCR reactionis systematis.

Nota: Perficite, fragmenta folium in solutione reactionis perfecte immersae sunt, et superfluitatem textus folium non addunt.

5.2: Folium aluminis methodi

Folium TEXTUM cum diametro 5—7mm secabit et in tubo centrifugis pone.Si matura folia es, quaeso vitare texturis venae folii principalis.Pipette 50ul Buffer P1 lysate in tubum centrifugium est ut lysatus folium texti perfecte immergere possit, illud in cyclo cyclo aut metallico balnei impone, et lyse 95°C ad 5-10 minuta.

50ul Buffer P2 solutionem neutralisationi addere et bene miscere.Lysata consequens ut exemplum exempli causa adhiberi potest et ad systema reactionis PCR additum.

Nota: Formulae moles inter 5-10% PCR systematis est, et 20% non excedat (exempli gratia, in 20µl PCR systema, 1-2μl solutionis lyseos, non plus quam 4μl, adde).

Gradus VI "

PCR reactionem

Post centrifugium per fistulam reactionem, in PCR amplificationis instrumento collocatur.

Animadverte:

Reactio templates amplificationis non-purificatae adhibet, itaque numerus cyclorum amplificationis plus 5-10 cyclorum est quam cum purgatur DNA template.

Step 7

Electrophoresis detectio et effectus analysis

M: 100bp DNA Scala

1\ 4: Purificatum DNA modum

2\5: Direct PCR method

3\6: Blank control

QC:

Eventus testium variarum moderaminum in experimento positas occurrere debent sequentibus conditionibus.Alioquin causa problematis resolvi debet, et probatio iterum absolvi problema.

Mensa 1. Proventus normales testium diversorum coetuum potestates

* Cum plasmida adhibetur pro potestate positiva, endogenous test effectus potest esse negativus

Consequens iudicium:

A. Testis effectus generum endogenis sample negativa est, significans DNA ad detectionem ordinariam PCR idoneam non posse e sample extrahi vel DNA extractum inhibitores PCR reactionem continere, et DNA denuo extrahi debere.

B. Test effectus gene endogenosi exempli positivi est, et probatio effectus gene exogenosi negativus est, ostendens DNA idoneum pro ordinario PCR deprehensio e sample extrahi, et iudicari potest quod XXX gene in exemplo non deprehensus sit.

C. Testis effectus gene endogenosi exempli positivi est, et probatio effectus gene exogenosi est affirmativus, ostendens DNA idoneum pro ordinario PCR deprehensio e sample extractum esse, et specimen DNA XXX gene continet.Confirmatio experimenta ulterius perfici possunt.

Gradus VIII

Design deprehensio primers

Post experimentum, utere solutione 2% sodium hypochloritis et 70% solutione ethanoli ad detergendam aream experimentalem ne pollutio environmental.