Morbus infectiosus COVID-19 a Severo Acuto Respiratorio Syndrome Coronavirus Type 2. Cum homo infectus est, frequentissima signa febrem, tussim et suspirium brevitatem includunt.
Exempla experimenta adhibita ab obiectis nasopharyngeis vel obiectis oropharyngeis colligi possunt.
Quid est pcr?
Vexillum modum coronavirus detectionis est catenae reactionis polymerase, PCR.Haec methodus late usus est in biologia hypothetica.Decies centena milia ad billions fragmentorum specificorum DNA celeriter imitari potest.
Novus coronavirus praelonga RNA genome subductis continet.Ad horum virus per pcr, RNA moleculas detegendas necesse est sequentia transpositis transcriptasis in complementarias DNA converti, et tunc noviter DNA summatim per modum procedendi PCR, quod vulgo RT-PCR notum est, ampliari possunt.
RT-PCR process
RNA extractionem
Ad hanc methodum faciendam, virales RNA radicaliter extrahendi sunt.Varietas RNA purificationis rhoncus apta adhiberi potest ad separationem opportunam, celeriter et efficacem.
Ut extrahere RNA viralem ornamentum commerciale utens, primum specimen tubo microcentrifugii adde et cum lysi quiddam commisce.Hoc quiddam valde denature ac plerumque constat ex phenol et guanidine isothiocyanate.Praeterea RNAse inhibitores solent adesse in lysis quiddam ad curandum solitudo integrae viralis RNA.
His additis lysis quiddam, vortex permixtus tubi pulsibus et ad locus temperatus incubat.Virus igitur in condiciones valde denaturandi lysedatur, quae a lysis quiddam providetur.
Post specimen lysed, fistula centrifugium ad purgationem procedendi adhibita est.Sample in tubo centrifugis oneratur et dein centrifugium est.
Haec ratio extrahendi periodum solida est methodus in qua consistens phase gel matricis silicae consistit.
Sub optimalibus sale et pH conditionibus, RNA moleculae membranae silicae ligant.
Eodem tempore interdum et alii contaminantes removentur.
Post centrifugationem, fistulam centrifugii pone in tubo collectionis mundam, liquamen abiicias, et lavabis quiddam adde.
Tubus in centrifugium pone iterum ad lavandum quiddam per membranam cogere.Haec omnia sordes reliquas e membrana removebit, sola RNA gel silica alligata relinquens.
Postquam specimen lotum est, tubo in microcentrifugium purum pone et quiddam elutionis adde.
Est deinde elutionis quiddam per membranam opprimere.Evolutionis quiddam RNA viralem e columna nentorum removet et purificatum RNA obtinet libero servo, inhibitoribus et aliis contaminantibus.
VERSUS 2
Mixta incumbo
Post RNA viralem extrahendam, proximus gradus reactionem mixtionem praeparare debet ad amplificationem Pcr.In hoc passu, intendi' dicitur.Haec contenta solutio est solutio contracta praemissa constans ex praemissis, transpositis, transcriptasis, nucleotidis, anterioribus primario, primario obverse, TaqMan specillo et DNA polymerase.
Postremo, ad hanc mixtionem perficiendam, additur RNA template.Fistulae mixtae gyro pul- sionis, et tunc mixtionis reactionis in pcr laminam oneratur.PCR tabula fere 96 puteos continet et simul multa exempla resolvere potest.
VERSUS 3
PER amplificationem
Deinde pone laminam in machina pcr machinam quae essentialiter est cyclus scelestus.
Tempus reale RT-PER adhibetur ad 2019 novas coronavirus deprehendere augendo scopum sequentiam in gene RdrRP, E gene et N gene.Electio scopi generum a primo et specillo sequenti dependet.
Primus gradus RT-PER est transpositio transversa.Linea prima complementarii DNA summatim perstringitur, quae a PCR primario reverso initiatur, quae ad complementariam RNA genome viralis ligat.Deinde transverse transcriptase DNA nucleotides ad 3′ finem primi addit ad complementum DNA synthesise viralis RNA.Temperatura et diuturnitas huius gradus a primers, scopo RNA pendent, et e transpositione transcriptase adhibitae sunt.
Deinde applicatur gradus denaturation initialis, qui sequitur denaturationem hybridarum RNA-DNA.Hic gradus necesse est DNA polymerase movere.Eodem tempore inversa transcriptase est inactivated.
PCR constat ex serie cyclorum scelerisque.Unusquisque cyclus constat ex gradibus denaturationis, furnum et extensionis.
Gradus denaturationis involvit calefactionem camerae reactionem ad 95 gradus Celsii et eo utens ad denaturationem duplicis subductis DNA template.
Proximo gradu, reactionem temperatus ad 58 gradus Celsius reducitur, permittens primarium annales ad partem complementariam eius unius subductis DNA template.Furnum temperatura directe dependet a longitudine et compositione primi.
In extensione gradatim, DNA polymerasis novum DNA linum componit quod est complementum ad filum DNA template.Addendo liberum nuclei complementarium ad Formulam in 5′to 3′ directionem a mixtione reactionis.Temperatura huius gradus ab usu DNA polymerasi pendet.
Post primum cyclum, duplex signum subductis DNA obtinetur.
Deinde intrant secundum cyclum.Duplex DNA subductis denaturatur ut duo moleculae subductis DNA efficiant.
Proximo gradu, reactionem temperatus deprimitur, primers annectitur ad singulas tabulas DNA subductis, et Taq-man specillum annexum est ad partem complementariam scopum DNA.
TaqMan specillum in fluorophore covalenter cum 5′ fine specillo oligonucleotide coniunctum constat.Cum iubar cycli emittitur, fluorophore fluororem emittit.Specillum praeterea exstinctoris in 3′end.Propinquitas notarii generum extinguentis deprehendere fluorescentiam prohibet.
In extensione gradus, DNA polymerasis novum filum componit.Cum polymerasium ad TaqMan specillum attingit, eius actio endogenosa 5′nuclease specillum inhaeret, tinctura a extinguente separans.
Cum quolibet cyclo PCR, plures moleculae tincturae emittuntur, ex incremento fluorescentiae intensio proportionali numero amplicons summato.
Haec methodus aestimare permittit numerum seriei alicuius praesentis in sample.Numerus fragmentorum duplicatorum DNA subductis in unoquoque cyclo duplicat.Ergo , PCR ad exemplaria analysi minutissima adhiberi potest.
Pro mensurae signum fluorescentium, lucerna halogen tungsten, excitatio sparguntur, pondero, lens, sparguntur emissionem et fabrica-usum camerae CCD copulatum custodiunt.
VESTIGIUM IV Detect
Pro mensurae signum fluorescentium, lucerna halogen tungsten, excitatio sparguntur, pondero, lens, sparguntur emissionem et fabrica-usum camerae CCD copulatum custodiunt.
Lucerna percolata a pondero relucet, transit per lens condensentem et ad cujusvis foraminis centrum tenditur.Tum fluorescens e foraminis e speculo emissa, per spargtum emissionem transit, et per cameram CCD deprehenditur.In unoquoque PER cyclo, lumen fluorophori sui concitati a CCD deprehendi potest.
Captum lumen in notitia digital vertit.Haec methodus vocatur PCR real-time, et vigilantia progressionis PC reactionis permittit.
Post tempus: Iul-19-2021
