Fluorescens quantitatis PCR (etiam notae TaqMan PCR, in sequentibus ad FQ-PCR referenda) est nova technologiae nucleicae quantitatis PE (Perkin Elmer) in Civitatibus Foederatis Americae, anno 1995. Fundata haec technologia in conventionali PCR, additis fluorescentibus intitulatis exploratoribus.Comparatus flexibilibus PCR, FQ-PER, multa commoda habet ad functionem quantitatis suae cognoscendam.Hic articulus notas, principia, methodos et applicationes technologiarum breviter describere intendit.
I Features
FQ-PCR non solum altum sensum habet ordinariae PCR, sed etiam ob applicationes proborum fluorescentium, potest directe deprehendere mutationem signorum fluorescentium in PCR amplificationis per systema conductionis photoelectrici ad obtinendum quantitatis eventus, qui multos defectus conventionales PCR superat, ita etiam altam proprietatem DNA hybridizationis et technologiae spectroscopiae altam habet.
Exempli causa, generatim PCR productorum observandum est ab agaroso gel electrophoresi et ethidio bromide maculante cum luce ultraviolacea vel a polyacrylamide gel electrophoresi et argento maculante.Haec non solum instrumenta multiplicia requirunt, sed etiam tempus et operam dat.Maculae Ethidium bromide adhibitae corpori humano nocent, et hae rationes experimentales implicatae occasiones contaminationis et falsis positivis praebent.Nihilominus, FQ-PCR operculum semel in oneratione exempli tantum aperiendum est, et processus subsequens operatio tubus perfecte occlusus est, quae non requirit PCR post-processionem, multa vitia vitans in operationibus conventionalibus PCR.Experimentum plerumque utitur ABI7100 PCR cyclorum thecorum cyclorum a PE comitatu evoluta.
Instrumentum has notas habet: ① Lata application: Pro DNA et RNA PCR producti quantitatis, expressionis gene investigationis, deprehensionis pathogenis, et optimiizationis per condiciones PCR.② Unicum quantitatis principium: Fluorescentius utens rimatur intitulatum, moles fluorescentiae cum PCR cyclo post excitationem laseris accumulabit, ut propositum quantitatis assequatur.③ Maximum operandi efficientiam: inaedificata in 9600 PCR cyclorum thermarum, computatorium 1 ad 2 horas moderatum, ut amplificationem et quantitatem 96 exemplorum automatice et synchrone perficiat.Non opus est electronico electrophoresi: Non opus est ut diluas et electronicas in sample, sicut speciali specillo utere directe in fistula reactionis deprehendere.⑤Nulla pollutio in pipelino: Unius tubus reactionis plene inclusus et systematis conductionis photoelectricae adoptantur, ut de pollutione solliciti non sit.Eventus reproducibilia sunt: magnitudo dynamica quantitatis usque ad quinque ordines magnitudinis.Cum igitur haec technologia feliciter amplificata sit, multis investigatoribus scientificis aestimata est et in multis campis adhibita est.
2 Principia ac methodi
Principium opus FQ-PCR est uti 5′ →3′ exonucleasi activitati Taq enzyme ut fluorescently intitulatum perquirere ad systema PCR reactionis addere.Specillum speciatim hybridize cum DNA template, quod in prima serie continetur.The 5′end of the probe is labeled with the fluorescence emission gene FAM (6-carboxyfluorescein, fluorescence emission peak at 518nm), and the 3′end is labeled with The fluorescence quenching group TAMRA (6-carboxytetramethylrhodamine, fluorescence emission peak at 582nm), the 3′beginning of the probe is phosphorylated to prevent the probe from being extended during PCR amplification.Cum specillum integrum manet, coetus extinguens fluxum emissionem coetus emittens supprimit.Cum coetus emissio ab exstinguendo separatur, inhibitio elevatur, et densitas optica in 518nm augetur et detegitur in systemate deprehensione fluorescens. In periodo renaturation, specillum hybridizes cum template DNA, et Taq enzyme in extensione periodo DNA template cum extensione primi moventis.Ubi specillum praecisum est, exstinguitur, et signum fluorescentium dimittitur.Quotiens exemplar exemplar est, abscinditur specillum, cum emissione signum fluorescentis est.Cum una-ad unam relationem inter numerum fluorophorum et numerum PCR productorum solutorum sit, haec ars ad accurate quantitare templates adhiberi potest.Instrumentum experimentale plerumque utitur ABI7100 PCR cyclorum thermarum a PE comitatu evolutarum, et aliorum cyclorum thermarum adhiberi possunt.Si ABI7700 reactionis genus reactionis ratio adhibita est ad experimentum, completa reactio, quantitatis eventus directe dari potest per analysin computatralem.Si aliis cyclis thermarum uteris, debes uti detectore fluorescentem ut metiaris signum fluorescens in tubo reactionis simul computare RQ+, RQ-, △RQ.RQ+ ratio lucidi intensio fluorescentis emissionis globi specimen tubi ad lucidum intensionem globi exstinguientis repraesentat, RQ- rationem utriusque in tubo blank repraesentat, △RQ (△RQ=RQ+-RQ-) repraesentat quantitatem fluorescentiae signi mutatione in PCR Post MGE, quantitatis eventus obtineri potest.Ob inductionem rimarum fluorescentium, proprietas experimenti signanter emendatur.Specillum consilium generaliter occurrere debet his conditionibus: ① Longitudo speciminis debet esse circiter 20-40 basium, ut specificatio ligandi servetur.Contentum basium GC est inter 40% et 60% ad vitandam duplicationem sequentium nucleotidum singularium.Vitare hybridization vel aliudque cum primers.Firmitas ligationis inter specillum et Formulam maior est stabilitate vinciendi inter primum et Formulam, ut Tm valor speciminis saltem 5°C altior sit quam Tim primarii valor.Praeterea speciminis coniunctio, homologia inter specillum et sequentia exemplatum, et distantia inter specillum et primarium omnes effectus experimentales attingunt.
Related Products:
China Real Time PCR Easyᵀᴹ-Taqman Manufacturer and Supplier |Foregene (foreivd.com)
Post tempus: Oct-15-2021
