Diagnosis technologiae hypothetica utitur methodis biologiae hypotheticae ad detectionem expressionis et structurae materialis geneticae humani corporis et variis pathogenis, ut propositum consequantur morbos praedicendi et diagnoscendi.

Nuper, cum upgradatione et iteratione technologiae diagnosticae hypotheticae, applicatio clinica diagnostica hypothetica latior et altius facta est, et forum diagnostica hypothetica periodum celeris progressionis ingressus est.

Auctor summat communes technologias diagnosticas hypotheticae in mercatu, et in tres partes dividitur: prima pars PCR technologiam introducit, secunda pars acidum nucleicum technologiam isothermal amplificationem introducit, et secunda pars sequentem technologiam introducit.

01

Pars I: PCR Technology

PCR technologia

PCR (polymerasis reactionis catenae) unum ex technologia in vitro DNA amplificationis cum historia plusquam XXX annorum est.

PCR technologia in anno 1983 aucta est ab Kary Mullis de Ceto, USA.Mullis pro PCR patentibus anno 1985 applicata et primam PCR academicam chartam in Scientia eodem anno edidit.Mullis Praemium Nobelianum in Chemia anno 1993 vicit.

Principia fundamentalia PCR

PCR ampliare scopum DNA fragmenta plus quam decies centena millia temporum.Principium est, quod sub catalysi DNA polymerasi, litus DNA parens in exemplum adhibetur, et primario specificus pro extensionis principio ponitur.Replicatur in vitro per gradus ut denaturatio, furnum, et extensio.Processus litii filiae DNA complementum ad litus template DNA parenti.

Vexillum pcr processum in tres gradus dividitur;

1. Denaturation: Utere caliditas caliditas ad fila duplicia separare DNA.Consectetuer vincula inter DNA duplices fila in calidis calidis (93-98°C).

2. Annealing: Postquam DNA subductis separata est, temperatura deprimitur ita ut primario DNA unico subductis ligare possit.

3. Extensio: DNA polymerasis incipit fila complementaria synthesare per fila DNA e primariis ligatis cum temperatura demissa.Expleto extensione, absolvitur cyclus, et numerus fragmentorum DNA duplicat;

Hos tres gradus 25-35 temporum reciprocus, numerus DNA fragmentorum exponentialiter augebit.

Ingenium PCR est quod diversi primarii diversis genesis scopo designari possunt, ut scopo fragmentorum generum brevi tempore ampliari possint.

Hactenus PCR in tria genera dividi potest, nempe ordinaria PCR, quantitativa PCR fluorescentis et digitalis PCR.

Prima generatio ordinariae PCR

Utere ordinario PCR amplificationis instrumento ad scopum gene augendum, tum agarose gel electrophoresis utere ad detegendum factum, modo analysi qualitativa fieri potest.

Praecipua primae generationis incommoda pcr;

-Pronus ad amplificationem non specialium et falsos eventus positivos.

-Deprehensio diu occupat et operatio gravia est.

Tantum probatio qualitativa fieri potest.

Secunda-generatio fluorescens quantitatis PCR

Fluorescentium quantitatis PCR (Real-Time PCR), etiam qPCR notum est, adhibita est monitorium cumulationis ampliatorum productorum per cumulum fluorescentium signorum, additis probis fluorescentibus, quae progressum systematis reactionis indicant, et eventus per curvam fluorescentiam diiudicare, et quantitari potest ope Cq valoris et mensurae curvae.

Quia technologia qPCR in systemate clauso exercetur, probabilitas contaminationis minuitur, et signum fluorescens pro quantitatis detectione viverra potest, ideo in praxi clinica maxime adhibita est et dominans technologia in PCR facta est.

Substantiae fluorescentes usu reali temporis fluorescentis quantitatis PCR tempore dividi possunt in: TaqMan explorationes fluorescentes, pharos hypotheticos et colores fluorescentes.

1) TaqMan fluorescent probe;

Per amplificationem per, specillum fluorescentium speciosum additur, addito primorso par.Specillum est oligonucleotidis, et duo fines cum notario fluorescenti et coetus fluorescentis coetus respective intitulati sunt.

Cum specillum integrum est, signum fluorescentium a notario emissum, a globo restinguendo absorbetur;in PCR amplificatione, exonuclease actionis Taq enzyme 5′3′ inhaeret et specillum deducit, faciens notario fluorescentium coetus et exstinguentis Coetus fluorescentis separatur, ita ut ratio fluorescentiae magnae fluorescentiae signum, hoc est, quotiens signum DNA multiplicatur, augeatur, multiplicatio fluorescentium cum formatione formatur, et formatio synthesis multiplicatur, et multiplicatio multiplicationis formatur, et multiplicatio multiplicationis multiplicationis multiplicatur.

2) SYBR fluorescent colores;

In systemate PC reactionis, excessus dysenteriae SYBR fluorescentis additur.Tinctura fluorescentium SYBR postquam in DNA duplicato-astra specie non incorporata est, signum fluorescentium emittit.Tinctura moleculae SYBR, quae catenae non incorporata est, nullum signum fluorescentium emittit, eoque signo fluorescenti providens. Auctum in PCR productorum, cum aucto in PCR productorum perfecte congruens est.SYBR DNA duplex subductis solum obstringit, ut curva liquatio adhiberi possit ad determinandum an PCR reactio specifica sit.

III) p

Caule ansa duplex oligonucleotide intitulata specillum formans hairpin structuram circa 8 bases circa 5 et 3 terminos facit.Sequentiae acidi nucleici ad utrumque complementum sunt inter se pares, ut coetus fluorescentium et coetus exstinguiendi sint stricta.Prope fluoritatem non producet.

Post producum PCR generatum, in annali processu, media pars pharyngis molecularis cum serie certa DNA coniungitur, et gene fluorescens separatur a gene extincto ad fluorescentiam producendam.

Praecipua incommoda secundae generationis PCR:

Sensibilitas adhuc caret, et speciminum humilium exemplarium detectio accurate non est.

Est color pretii influentia, effectus suscipit impedimentum.

Tertia generatio digitalis PCR

Digital PCR (DigitalPCR, dPCR, Dig-PCR) numerus exemplaris sequentis scopo per detectionem finis computat, et accurate quantitatis absolutae detectionem facere potest sine internis moderaminibus et curvarum norma.

Digital PCR deprehensio endpoint utitur et a valore CT (liminis cycli non dependet), sic reactio digitalis PCR minus afficitur per amplificationem efficientiae, et tolerantia ad PCR inhibitores reactionem emendatur, cum summa accuratione et reproducibilitate.

Ob notas subtilitatis et subtilitatis altae, non facile impeditur per reactionem inhibitores, et consequi potest veram quantitatem absolutam sine norma productorum, quae investigationis et applicationis hotspot facta est.

Secundum diversas rationes unitatis reactionis, in tria genera dividi potest: systemata microfluidica, chip et stilla.