Loquitur omnes de principio experimenti qRT-PCR, de primario consilio, ex interpretatione, etc., at puto me communicare cum operatione experimentalis qRT-PCR.Praesent consequat tempus purus sed efficitur.

Priusquam qRT-PER faceremus, opus est ut proprias RNA operationesque methodos lucide cognoscamus.Ceterum conatus est consequitur consequitur, quam exercendo.Priusquam ergo qRT-PCR agimus, quaestiones sequentes determinare oportet (quarum nonnullae tantum ad SYBR valent).

1 Certus esne RNA tuum non degradatum?

NanoDrop 2000 solum intentionem et puritatem RNA deprehendere potest, integritatem RNA deprehendere non potest.

RNA (RNA Intesity Number) valorem integritatem RNA reflectere potest, quae ab Agilente 2100 Bioanalyzer detegitur.

Fig. Schematica schematismi RIN valorum pro diversis RNA samples (eukaryotes)

Tamen plerumque laboratoria Agilent 2100 Bioanalyzer non habent.Hoc in casu, per formaldehyde gel deprehendere possumus, sed postulationem summam RNA altam esse, methodus velocissima tam ordinaria gel electrophoresis utatur.Quaeritur ut in ambitu libero nucleasi esse, ut in piscinam electronicam, sol lagenam, bracket et cristam cum aqua DEPC elui necesse est.Agarosus etiam liberum nucleasum (dum recens aperitur), et Buffer Loading recenter quam maxime aperiendum est, cum 1.2% gel.

Nota quod gel debet totaliter dissolvi, alioquin causat vincula inhomogenea, ut patet in 9 figura.Si voltatio nimis alta est vel currit per longum, calefacit et causat RNA degradationem generabit, sic intentione et tempore rationabiliter temperetur.Praeterea cursus gel etiam amplius determinare potest an DNA residuum in sample sit, et observa an numerus vinculorum retentarum in bene dispensando sint.

Figura.Gel electronica detectio RNA

2 Certusne es de intentione cDNA tui?

Experientia magnorum fratrum in laboratorio est quod cDNA 20 ul systematis ab unaquaque inversione obtinetur directe 20X diluitur, dum sorores post-doctrices 10X diluuntur.Soleo ex situ.Quia qualitas RNA a singulis personis differt, vicissitudo etiam alia est, et technicae conversio stabilis esse non potest.

Quotiescumque igitur cDNA inversam obtineo, primum circiter 3 tempora diluam, tum gene custodiae utar ad faciendum RT-PCR, numerus cyclorum est fere 25 cyclorum, ad recognoscendas intentiones specificas, ac deinde factorem finalem dilutionem determinabo.

3 Certus esne primers tuos facilia esse usui?

Potest curvam liquescentem ipsius qRT-PER transire, sed haec adhuc pecunia constat.Laboratoria enim sine multa pecunia, cum primarios multum nanciscuntur, ordinariis RT-PCR uti possunt si una manus sit et primariorum proprietatem cognoscere.Si officinarum pecunia non caret, proprietas omnium primariorum semel per curvam liquationem invenire potest.

4 Certus esne condiciones experimentales tuae idoneae esse?

SYBR ab valida luce defendi debet, ita caput lucis avertere conantur, cum reagens SYBR addit, et solum opus est ut luce obscura ad eam perficiendam accedat.

Copia SYBR in 4°C.Cum in usu est, leniter invertunt ac deorsum miscere bene spumantes vitare, nec fortiter vortex.

Quaedam iuniores sorores quasi tabulas pcr tabulas hauriunt propter metum exempla miscentes, quod nefas est.Quoniam figuli vestri valde probabile sunt collectionem fluorescentium significationum afficere, plerumque juniores commendamus ut codicillos experimentales memoriae adiuvent, ut infra patebit.

Figura.qRT-PCR specimen loading tabulae

5 Certus esne facere quod iustum est?

Vide ut caestus deferant, caestus gerunt, chirothecas gerunt, et ter res magnas dicunt.

Ut detectio SYBR in lucem reducatur, personaliter placet primum exemplum addere, sicut in figura infra ostenditur.Secundum experientiam, addita parva Formulae errorum sampling causare verisimile est.Itaque, ut errori minimo additamento parvae partis exempli causatur, iterum specimen duplicare soleo, et duplicem quantitatem cum addit specimen ad quantitatem additi H2O2 minuendam.

Figura.Schematic tabulae qRT-PCR loading

Deinde configurare qRT-PCR systema hoc modo.

Figura.qRT-PCR systema praeparatio diagram

NOTE: Configuratio processus in glacie fieri debet.

His additis specimen, crustulum cinematographicum perspicuum.Stude ne attingas superficies cinematographici perspicui signandi manibus tuis, solum ex spatio ad utrumque cinematographicum operandum.Quia fingerprints possunt etiam afficiunt collectionem annuorum fluorescentium.Tum centrifugium utere ut celeriter centrifugium 10 levi celeritate ad ne exemplum in muro pendeat.

Related Products:

Cell Direct RT-qPCR ornamentum

RT Securus II