Overview
Celeri idem de plantis transgenic
Textus/Tong Yucheng
Experimentalis operatio / Han Ying
Editor / Wen Youjun
Verba/1600+
Lectio tempus suggesserant / 8-10 minutes
Celeri idem de plantis transgenic
Ut advena in laboratorio, bonum opus non est plantas positivas protegere e fasciculo plantarum cum humili rate conversionis.Primo, DNA e pluribus exemplis singillatim extrahi oportet, et deinde genes peregrini per PCR deprehendentur.Sed eventus blank et ligamenta saepe cum paucis item interdum, sed discernere impossibile est utrum detectiones fallantur an falsae detectiones..Valdene inops est contra tales processus experimentales et eventus?Noli sollicitare, frater, te docere quomodo plantas transgenicas positivas facile et accurate protegere.
I step: Design deprehensio primers
Gen. endogenosa et gene exogenosa secundum specimen probandum detegendum decernite, et 100-500bp seriem repraesentativam in gene pro primario designandi elige.Boni primarii accurate deprehendendi eventus et tempus deprehendendi breviare possunt (vide appendix pro primers communiter detectio).
Nota:
Primitiorum nuper designati opus reactionem condiciones optimizare et accurationem, praecisionem, deprehensionem limitem deprehensionis comprobare antequam permagnam deprehensionem faciendo.
Step 2:Explicare experimentum protocol
Imperium positiuum: DNA purgata utere continens fragmenti scopo ut exemplum ut determinet utrum ratio reactionis PCR ac condiciones normales sint.
Negans / blank imperium: uti a DNA template vel ddH2O quod fragmentum scopum non continet sicut exemplum ad detegendam num fons contaminationis in PCR systematis sit.
Internum reference imperium: primario/proba compositione generum endogenosi exempli explorandi ad perpendendum num Formula PCR deprehendi possit.
Nota:
Positivas, negativas/blank potestates et controllata interna ponenda sunt pro singulis experimentis ad valorem eventuum experimentalium perpendendos.
Step3: Experimentum praeparationis
Ante utendum, vide an solutio sit aequaliter mixta.Si praecipitatio inveniatur, oportet dissolvi et misceri secundum praeceptum ante usum.2×PCR miscere necesse est ut saepe cum micropipette piperi et mixto misceatur ante usum ad evitandas inaequales distributiones.
Nota:
Mandata excipe et diligenter ea lege et ante experimenta stricte ad normam mandatorum praepara.
Gradus IV: Pone PCR reactionem ratio
Iuxta protocollum experimentalem, primers misce, H .2O, 2×PCR misce, centrifugium et tubus reactionis singulas distribue.
Nota:
Pro magna-scala vel diuturna probatione, commendatur uti systema reactionis PC enzyme continentis, quae aerosol contaminationem a PCR productorum causatam efficaciter vitare potest.
Gradus V, addere reactionem template
Directa per technologiam adhibita, non opus est pro taedio acidi nucleici processus purificationis.Exemplum specimen formulae intra 10 minutas praeparari potest et ad respondentem PCR reactionis systematis adiungi.
Nota:
Lysis modus deprehendendi melius effectum habet, et productum consecutus ad plures motus deprehendendi adhiberi potest.
5.1: Pcr folia directa
Secundum magnitudinem picturae in manibus, folium textus cum diametro 2-3mm secare et pone in PCR reactionis systematis.
Nota: Perficite, fragmenta folium in solutione reactionis perfecte immersae sunt, et superfluitatem textus folium non addunt.
5.2: Folium lysis method
Folium TEXTUM cum diametro 5—7mm secabit et in tubo centrifugis pone.Si matura folia es, quaeso vitare texturis venae folii principalis.Pipette 50ul Buffer P1 lysate in tubum centrifugium est ut lysatus folium texti perfecte immergere possit, illud in cyclo cyclo aut metallico balnei impone, et lyse 95°C ad 5-10 minuta.
50ul Buffer P2 solutionem neutralisationi addere et bene miscere.Lysata consequens ut exemplum exempli causa adhiberi potest et ad systema reactionis PCR additum.
Nota: Formulae moles inter 5-10% rationis PCR esse debet, et 20% non excedere (exempli gratia, in 20µl PCR systematis, 1-2μl addere quiddam Lysis, non plus quam 4µl).
Gradus VI, PCR reactionem
Post centrifugium PCR fistulae reactionis, eas in PCR instrumentum amplificationis pone.
Nota:
Reactio templates amplificationis non-purificatae adhibet, itaque numerus cyclorum amplificationis plus 5-10 cyclorum est quam cum purgatur DNA template.
Gradus VII: Electroforesis detectio et effectus analysis
M:100bp DNA Scala
1\ 4: Purificatum DNA modum
2\5: Direct PCR method
3\6: Blank control
Regimen quālitātis:
Proventus testium variarum moderaminum in experimento positas occurrere debent sequentibus conditionibus.Alioquin causa problematis resolvi debet, et probatio iterum absolvi problema.
Mensa 1. Proventus normales testium diversorum coetuum potestates
* Cum plasmida adhibetur pro potestate positiva, endogenous test effectus potest esse negativus
Consequens iudicium:
A. Testis effectus generum endogenis sample negativa est, significans DNA ad detectionem ordinariam PCR idoneam non posse e sample extrahi vel DNA extractum inhibitores PCR reactionem continere, et DNA denuo extrahi debere.
B. Testis effectus gene endogenosi exempli positivi est, et probatio effectus gene exogenosi negativus est, ostendens DNA idoneos pro ordinario PCR deprehensio e sample extrahi, et iudicari potest quod XXX gene in sample non deprehensis.
C. Test effectus gene endogenosi exempli positivi est, et probatio effectus gene exogenosi est positivus, ostendens DNA idoneum pro ordinario PCR deprehensio e sample extractum esse, et specimen DNA XXX gene continet.Confirmatio experimenta ulterius perfici possunt.
Gradus VIII: Design deprehendatur primers
Post experimentum, utere solutione 2% sodium hypochloritis et 70% solutione ethanoli ad detergendam aream experimentalem ne pollutio environmental.
Appendix
Mensa 2. Communiter primers ad generalem PCR detectionem plantarum genere mutationis
Relatio documenti:
SN/T 1202-2010, Qualitative PCR deprehensio methodus ad ingredientia in cibo genetice mutationis plantae.
Ministerio Agriculture Annuntiationis 1485-5-2010, Testis ingredientium genetice mutationis plantarum et earum productorum M12 et earum derivationum.
Post tempus: Iun-09-2021
