Sterilitatem pipettarum apicibus et EP tubes, etc.

1. Praeparate 0,1% (millesimum) DEPC (substantia valde toxica) cum aqua deionizata, diligenter utere in cucullo fumo, et repone in 4°C a luce;

DEPC aqua est pura aqua tractata cum DEPC et sterilis per caliditas et alta pressura.Expertus libero ut RNAse, DNase ac proteinase.

2. pipettam tip et EP fistulam pone in 0.1% DEPC, et ut fistulae tip et EP tubus impleantur 0.1% DEP.

3. Protege de luce, sta, pernoctare (12-24h);

4. Cista continens tip et EP tubus in DEPC macerari non oportet.Post DEPC vel EP tubo aquam dure removens, eam fac et involve.

5. 121 gradus Celsius, 30min

6. 180 gradus Celsius, pluribus horis siccis (saltem 3 horis)

Nota: a.Aliquam caestus et larvas gerentes DEPC tractantes!b, vel sine sterilitate DEPC, 130 , 90min autoclave (multae sterilizationis caliditatis laborantium bis)

RNA extractionem considerations

Duo phaenomena maioris textus RNA defectus solitudo

RNA degradatio et residua spurcitiarum in fibris;de deformitate inspiciamus primum cur RNA e cellulis excultis extrahendis non facile degradetur.Existens RNA extractionis reagentes omnes continent partes quae RNase celeriter inhibent.Lysatum ad cellulas excultas adde et simpliciter misce, omnes cellulae cum lysate permisceri possunt, et cellulae omnino lyseduntur.Post cellas lysed, ingredientia activa in lysate statim intracellulare RNase inhibent, sic RNA integra manet.Videlicet, quia cellulae excultae cum lysato facile et plene continguntur, RNA earum non facile degradatur;ex altera parte, RNA in texta facile deprimitur quia cellulae in textura non sunt facile ad lysatum contactum.ob sufficientem contactum.Ita,posito modo ut textus in unam cellam convertat, dum RNA navitatem inhibuit, quaestio degradationis omnino solvi potest.

Liquor milling talis modus efficacissimus est.Attamen liquor NITROGENI milling methodus valde molesta est, praesertim cum numerus exemplorum magnus est.Hoc proximum est optimum: homogenizer.Thehomogenizermethodus non considerat quaestionem quomodo activitatem RNase antequam cellae cum lysate contingantur, sed potius orat ut rate distractionis textus velocior sit quam rate ad quem RNase intracellulare RN abducit.

Effectus homogenizer electrici melior est;et effectus homogenizer vitri pauper est, sed in genere, modus homogenizer non potest impedire phaenomenon degradationis.Si ergo degradetur extractio, adhibeatur originalis homogenizer electrica ad molendum cum nitrogen liquido;vitrum originale homogenizer mutandum est ad homogenizer electricum vel cum nitrogen liquido directe molitum.Quaestio fere 100 fieri potest.certus adepto.

Impudicitia residuum problema, experimentorum subsequentium afficientium, plures causas habet quam degradatio, et solutiones correspondenter diversae sunt.Finitione,si degradatio vel immunditia residua in texta est, methodus extractio/reagens pro materia experimentali specifica optimized est.Non habes ad optimorum exemplorum praestantiam uti: potes quaedam bestiolas quasdam sicut pisces/gallinas e foro emere, partem materiae RNA extractionis, alteram pro dapibus extrahendi partem - tere ore, stomacho et intestinis Extract.

Scopum RNA extracti RNA pro diversis experimentis sequitur, eiusque qualitates requiruntur diversae

cDNA constructionis bibliotheca requirit RNA integritatem sine residuo enzyme inhibitores reactionis;RNA integritas superiorum postulata septentrionalis et inferiora requisita ad inhibitores residua reactionis enzyme;RT-pcr nimia integritas non requirit rna;sed enzyme motus inhibet.Reliquae requiruntur stricte.Input output determinat;quoties propositum obtineat summa pu- rna, constat populo et pecunia.

Collectio/repono Exempla

Factores Degradationis afficientes Post specimen corpus vivum/vel primigenium incrementum environment, enzymes endogenae in sample incipient RNA degradare,et degradatio rate se habet ad contentum enzyme et temperate.Traditionaliter, duo tantum modi sunt ut actio enzyme endogenous omnino inhibeat: lysatum statim addis et homogeneizare penitus et celeriter;in frusta secare et statim in nitrogenium liquidum durare.Utraque appropinquatio celeriter operationem requiret.Haec omnibus speciminibus apta est, illa vero textuum modo contenta humili cellulis et enzymis endogenosis ac facilioribus ad homogenizandum apta est.Speciatim textus plantae, hepatis, thymi, pancreatis, splenis, cerebri, adeps, textus musculi, etc. sunt optime congelata liquido nitrogenio ante procedentem.

Fragmentum et homogenization exempla

Factores afficiens turpis et cede Sample ruptio estnam penitus homogenizationque est pro plenaria et plenaria relaxatione RNA.Cellulae directe homogenized sine fractura esse possunt.Tela homogenized nonnisi postquam fractum est.Fermentum et bacteria frangi oportet cum enzymis correspondentibus antequam homogenized possunt.Tela cum contento enzyme inferiore endogeno et faciliore homogenizatione simul in lysate ab homogenizero opprimi et homogenizari possunt;textura plantarum, hepatis, thymus, pancreas, splen, cerebrum, adeps, musculus textus et alia exempla, quae vel alta sunt in enzymis enzymis vel non facile homogenantur;itaque textus discidium et homogenizationes separatim faciendae sunt.Certissima et fecundissima methodus ruptionis liquido nitrogen molat, et certissima methodus homogenizationis est usus homogenizer electrici.Nota peculiaris de molaribus cum nitrogenis liquidis: specimen non debet conti per totum processum millinginum, sicut enzymae endogenae magis in concreto funguntur.

Electio lysate

Commodum afficiens operandi et factorum spurcitiarum endogenarum residuarum. Vulgo adhibita solutiones lysis fere inhibere possunt activitatem RNase.Praecipuum igitur punctum solutionis Lysis eligendi est respectu methodi purificationis considerare.Una exceptio est:samples with high endogenous enzyme content are recommended to use a lysate containing phenol to increase the ability to inactivate endogenous enzymes.

Purificationis modus electionis

Factores, qui immunditias endogenas residuas afficiunt, celeritas extrahendi. Exemplaria munda sicut cellae, eventus satisfactoriis paene omni methodo purificationis in manibus obtineri possunt.Sed propter multa alia exempla, praesertim cum magnis gradibus immunditiis ut plantae, hepatis, bacteria, etc., aptam purificationis methodum eligens crucialit.Columna purificationis centrifugae methodus celeritatem extrahendi ieiunium habet et efficaciter immunditiam removere potest quae subsequentem reactionem enzymaticae RNA afficit, sed est pretiosa (Potest ignoscere rhoncus cost-efficacem offerre, strepita magis detailshic);oeconomicis et classicis purificationis modos utens, sicut praecipitatio LiCl, etiam eventus satisfacientes consequi potest, sed operandi tempus longum est..

"Tres disciplinas et octo Operas" pro RNA extractionem

Disciplina 1:Finis contagione enzymes exogenous.

nota 1;Larvas et chirothecas stricte gerunt.

Nota 2:Tubae centrifugiae, capita apicum, virgae pipettae, lacus electrophoresis et scamna experimentalia quae in experimento sunt bene disponuntur.

Nota III;Reagentes / solutiones experimento implicatae, praesertim aqua, RNase-liberum esse debent.

Disciplina II.Operatio endogenous enzymes angustos

Nota 4:Congruum homogenization modum elige.

nota 5;Congrum lysate elige.

Nota VI;Incipiens moles sample moderari.

Disciplina III.Declara te ad extractionem

nota 7;Cum systema lysate quovis accessu ad maximam quantitatem principii exempli, successus extractionis in rate defluit acriter.

Nota 8:Solum criterium oeconomicum pro felici RNA extractionis successu in experimentis subsequentibus non cedit.

Top X Fontes RNAse contagione

1. Digiti primum principium sunt enzymorum exogenorum, itaque chirothecae frequenter gestandae et reponi debent.Praeterea larvae quoque gestandae sunt, quia respiratio etiam fons enzymes maximus est.Additum beneficium larvae chirothecae gerendae experimento tutandum est.

2. Apices pipettae, tubi centrifugii, pipettae - RNase sola sterilizatione moveri non possunt, ita apicibus fistulae et tubi centrifugii cum DEPC tractari debent, etiamsi tractantur ut DEPC notentur.Optimum est utere ad pipettam specialem, eam detergere cum 75% pila bombicis alcohol ante usum, praesertim baculum;praeterea cave, ne capite detracto utaris.

3. Aqua / quiddam RNase contagione liberum esse debet.

4. Saltem mensa probata abstergi debet cum 75% globulis alcoholicis.

5.Endogenous RNase Omnes telae enzymes continent endogenosae, tam velox congelatio textuum cum nitrogeno liquido optimus modus est ad degradationem minuendam.Liquor NITROGENIUM Repositionis/molendi modus quidem incommodus est, sed sola via textuum cum gradibus enzymorum endogenorum.

6. RNA exemplaria RNA extractionis productorum vestigia contaminationis RNase continere possunt.

7. Extraction Plasmidis extractio Plasmidis saepe utitur Rnase ad RNA degradandi, et Rnase residua cum Proteinase K digesta et extracta per PCI.

8. RNA reposita Etiam si reposita fuerit in low temperie, de RNase vestigium degradationis RNA efficiet.Optima solutio ad diuturnum conservationem RNA est suspensio salis/alcohol, quia alcohol omnem actionem enzymaticam in frigidis temperaturis vetat.

9. Cum cationes has (Ca, Mg) contineant, 80C ad 5 minutas calefacere efficiet RNA adfixam esse, ergo si RNA calefieri debet, solutionis conservativae necesse est ut agentem chelante (1mM Sodium Citrate, pH 6.4) contineat.

10. Enzymes in experimentis subsequentibus a RNase contaminari potest.

X Tips ad RNA extractionem

I: Celeriter ne RNAse actio.Exempla cito congelata sunt post collectionem, et RNase excitatur ab operatione celeri in lysis.

2: Elige methodum extrahendi idoneam pro texti magno ribozyme contento, et textus adipone optime utendi methodo phenol continens.

3: Praedictio qualitas requirit Septentrionalem, cDNA bibliothecam constructionem altam integritatem requirit, et RT-PCR et RPA (praesidium Ribonuclease tentamentum) altam integritatem non requirunt.RT-PER princeps puritatis postulat (inhibitor residua enzyme).

4: Prorsus homogenizationis clavis est ad degradationem emendandam et minuendam.

5: Perscriptio integritatis RNA electronicae detectionis, 28S: 18S = 2:1 signum perfectum est, 1:1 etiam experimentis plerisque acceptum.

6: remotio DNA pro RT-PCR, analysis ordinata maxime placet uti Dnase I ad DNA removendum.

7: contagionem enzymorum exogenorum reducere - enzymes extrinsecus importari non possunt.

8: Cum humilis-contentio acidi nucleici intendo, co- praeceptio reagens adicienda est.Sed impedire co-precipitans enzymes et DNA contaminationem continens.

9: Prorsus dissolve RNA, si opus est, calefac in 65C pro 5 minutis.

idoneam repono modum

Condiri potest ad -20C ad breve tempus, et ad -80C diu.Primus gradus RNA meliorandi causa est scire RNA contentum diversorum exemplarium valde variare.Copia summa (2-4ug/mg) ut hepar, pancreas, cor, abundantia media (0.05-2ug/mg) ut cerebrum, embryonem, renem, pulmonem, thymum, ovarium, humilis abundantia (<0.05ug/mg) mg) ut vesicae, ossis, pinguis.

1: Cellulae Lyse dimittendi RN – si RNA non dimittitur, cede reducetur.Electrica homogenizationis melius quam aliis modis homogenizationis operatur, sed etiam cum aliis modis coniungi potest, ut liquida mashing nitrogen, digestio enzymatica (Lysozyme/Lyticas)

II: Optimizationis extrahendi methodus.Maximae difficultates cum methodis phenol-fundatis incompletae stratificationes et detrimentum partiale RNA (supernatantem prorsus removeri non possunt).Stratificatio imperfecta debetur summo nucleico acido et interdum contento, quod solvi potest augendo quantitatem lysati adhibiti vel minuendi quantitatem exempli.Gradus extractionis chloroformis ad textus adiposi additus est.RNA damnum reduci potest per flare vel removendo stratum organicum quod sequitur centrifugationem.Maximus forsit cum columna centrifuga-substructio modi est excessus exempli.

Classic Extraction Tips

1. Phenol purgatio: parem volumen adde ex 1:1 Phenol/Chloroforme ac fortiter 1-2 minuta misce.Centrifugium altum celeritatem pro 2 minutes.Supernatantem diligenter remove (80-90%).Numquam accumsan mediocrem ad per.Par volumen solutionis reactionis addi Phenol/Chloroformi et supernatanti amoveri potest.Duo supernatantes simul misceri possunt ad praecipitationem acidum nucleicum ut fructus meliores reddant.Noli nimium mitis esse cum miscens, nec omnia supernatantem tollere conaris.

2. Lavatio cum 70-80% ethanolo: In lavatione acidum nucleicum suspendi debet ut sal residua abluatur.Eodem tempore, statim ethanolum effuso, centrifugium in magna celeritate brevi secundo, et residua ethanolum cum pipette auferunt.Dissolve post stantem ad locus temperatus pro 5-10 minutes.

11. Extractio institutionum specialium

1. TEXTUS fibrosus: Clavis ad RNA extractionem e fibrosa ut cor/sceleti musculus textus omnino perturbare est.Hae telae densitatem cellulæ humilem habent, itaque moles RNA per unitatem pondus textus humile est, et melius est ut quam maxime incipias.Vide ut telam sub congelationi conditiones penitus conteras.

2. Tela cum dapibus magnis / content pinguis: cerebrum/vegetabile contentum pingue est altum.Post PCI extractionem, supernatant flocculas albas continet.Supernatantem rursus cum chloroformi extrahendum esse.

3. Tela magna contenti nucleici acido/ribozyme: lienis/thymus altum habet acidum nucleicum et ribozyme contentum.Molendum TEXTUS sub congelatione condiciones, quas celeri homogenizatione sequitur, efficaciter ribozymes movere potest.Attamen si lysatus nimis viscosus est (ob summam contenti acidi nucleici), PCI extractio efficaciter stratificare non poterit;addito Lysato more hanc quaestionem expedire potest.Multiplex PCI extractiones plus residua DNA removere possunt.Si formas albas praecipitas statim post alcohole addens, contaminationem DNA indicat.Re-extraction cum acidic PCI post dissolutionem DNA contaminationem removere potest.

4. TEXTUS Plantae: TEXTUS Plantae complexior est quam textus animalis.Generatim plantae sub conditionibus nitrogenis liquidis tritae sunt, itaque RNA degradatio per enzymes endogenos raro est.Si quaestio degradatio non solvitur, fere certe causatur ab immunditiis quae in exemplo sunt.Immunditia in multis plantis contenta residua ducet, et causa residua saepe est, quia istae sordes aliquas cum RNA similes habent: praecipito et praecipito, et adsorbo et adsorbo.Haec indoles enzyme inhibitores validissimos esse statuunt.

Nunc, RNA extractio commercialis reagentis fere omnibus textuum animalium cum parvis compositionibus accommodari potest, sed paucae RNA extractiones commerciales quae maxime textuum plantarum aptari possunt.Fortunate, Foregenes providere potest specialeplant RNA extraction kits, habemusPlant Total RNA Isolation kit, Plant Total RNA Isolation ornamentum Plus.Haec specialiter destinatur ad plantas altas in polysaccharide et in polyphenol contentis.Pro RNA extractio, opiniones ex lab utentibus maxime bonae sunt.

12. Effectus exempli congelatio et tabidaque specimen congelatum maius esse potest, et prius secari debet quam pro RNA extractione adhibita.Exempla tendunt ad conflandum (forte ex parte) in sectione.Specimina congelata necesse est ante RNA extractionem ponderari, et tabida in hoc processu certo accidere.Nonnumquam, tabidaque sample etiam fit per processum molarem nitrogenium liquidum;vel specimen congelatum protinus additur lysati sine liquido molentis nitrogenis, et tabida ante perfectam homogenizationem determinate occurrit.Experimenta demonstraverunt textura congelatum magis proniorem esse ad RNA degradationem in tabida quam in recens texta.Ratio probabilis: Processus congelatus thaw structuras intra cellam dissolvit, eo facilius enzymes endogenosos cum RNA in directum venire facit.

13. Iudicium de RNA qualitatis Solet, electronico ad integritatem RNA diiudicandam adhibetur, et A260/A280 puritatem RNA diiudicamus.In theoria integra RNA rationem habet 28S:18S = 2.7:1, et notissima ratio maxime in lumine ponitur 28S:18S=1 2:1.Revera nulla fere de RNA extra specimina extra quam cellas extracta est in ratione 2:1 (hoc utens Agilent Bioanalyzer consecutus est).

Electrophoresis eventus RNA multis factoribus afficiuntur, inclusa structura secundaria, conditiones electrophoresis, onere exempli, gradu satietatem ab EB, etc. electrophoresis indigena utere ad deprehendere RNA et uti DNA Marker ut imperium.Si 28S ad 2kb et 18S ad 0.9kb patent, et 28S: 18S> 1, integritas experimentis posteriorum maxime requisitis occurrere potest.

A260/A280 index est qui multam confusionem attulit.Ante omnia necesse est declarare sensum originalem huius indicatoris pro acida nucleica: pura RNA, eius A260/280 = circiter 2.0.Purus RNA est 'causa' et A260/A280 = 2 effectus est.Quisque autem A260/A280 ut 'causa' utitur, existimans "si A260/A280 = 2, RNA purus", quod naturaliter confusionem ducit.

Si interest, paulum reagens quod saepe in extrahendo adhibetur, ut phenol, guanidine isothiocyanate, PEG, etc., ad RNA specimen tuum addere potes et rationem A260/A280 metire.Res est quod multi reagentes extrahendi RNA, ac multae immunditiae in sample circa A260 et A280 hauriunt, afficientes A260/A280.

Ad praesens accessus instructissimus est RNA exemplaria in 200-300 um range lustrare.Curva pura RNA hoc notas habet: curva levis, A230 et A260 duo puncta inflexiones sunt, A300 prope 0, A260/A280 = circa 2.0, et A260/A230 = circa 2.0.Si schedulae notitiae non suppetunt, ratio etiam A260/A230 determinanda est, quia haec ratio est sensibilior ad auferendum omnes immunditias quae reactionem enzymaticam afficiunt.Rationem habeatis linearis extensionis machinae (0.1-0.5 pro A260).

Duo alia phaenomena utilia sunt: ​​ratio fere 0.3 inferior erit, cum aqua mensuratur A260/A280;proportio autem mensurata in 10 mM EDTA est altior fere 0,2 quam mensurata in 1 mM EDTA.

Related Products:

China Plant Total RNA Isolation Kit Manufacturer and Supplier |Foregene (foreivd.com)

RNA solitudo series Suppliers and Factory |Sinarum RNA series solitudo fabrica (foreivd.com)

RNA series solitudo - Foregene Co., Ltd.