Opificem experti sumus.Conciliandos plures in certificationibus crucialorum sui mercati ad magnum minuendum Sinarum Maximum sensum Rt- unus-gradus ProbeQpcrOrnamentum V2, Qualitas est vita officinas, Focus on mos postulatio est fons societatis superstes et progressus, adhaeremus honestati et fidei operandi habitus, exspectamus adventum tuum!
Opificem experti sumus.Conciliandos plures in certificationibus decretoriis sui mercatus estChina Taq DNA Polymerase, Qpcr, Societas nostra pollicetur: rationabiles pretia, breves productiones temporis et post venditiones utiles operae, nos etiam gratam vobis facimus ut officinas nostras quandocumque vis visitare.Vtinam nunc nobis iucunda et longa negotia simul vocabula haberemus!!!

Descriptiones

Hoc ornamentum singulare systematis quiddam utitur lysis qui RNA ab cultura exemplorum cellularum ad RT-qPCR reactiones cito dimittere potest, eoque tempore consumptionis et laboriosi RNA purificationis processum eliminat.RNA templates in iustis 7 minutis obtineri potest.Direct RT Mix et 2× Direct qPCR Mix-SYBR reagentibus ornatum ornatum cito et efficaciter consequi potest realem temporis quantitatem PCR proventuum.

5×Direct RT Mix et 2×Direct qPCR Mix-SYBR validam inhibitorem tolerantiam habent, et lysatus exemplorum adhiberi potest ut Formula pro RT-qPCR directe.Hoc ornamentum continet singularem RNA altam affinitatem transpositam Foregene transversam, et Hot D-Taq DNA polymerase, dNTPs, MgCl₂quiddam, PCR optimizer ac stabilientem.

Specifications

200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns

Ornamentum components

Features & commoda

Simplex et efficax: cum Cell Direct RT technologia, RNA exempla in iustis 7 minutis obtineri possunt.

■ Specimen exiguum exiguum est, ut infima ac 10 cellulae probentur.

■ Alte throughput: cito deprehendere potest RNA in cellulis excultis 384. 96. 24, 12, 6-sculpturas bene.

■ DNA Eraser cito removere potest genomas emissas, ictum in experimentis subsequentibus proventuum valde minuere.

■ Optimised RT et qPCR ratio duos gradus RT-PCR transversos reddit, magis efficientem et PCR specialiorem, et resistens inhibitoribus reactioni RT-qPCR.

Ornamentum application

Scopus applicationis: cellulae excultae.

- RNA dimissa per exemplum lysis: solum applicabile ad RT-qPCR exemplum huius ornamenti.

- Ornamentum adhiberi potest ad sequentes fines: analysis gene expressionis, verificationis gene mediatae siRNA effectus silendi, medicamentum protegendi, etc.

Diagram

Repono et fasciae vitae

Pars I huius ornamenti condi debet in 4℃;Pars II condi debet -20℃.

Protease Plus II reponenda in 4°, non congelatur in -20℃.

Reagens 2×Direct qPCR Mix-SYBR in tenebris condi debet;si frequenter usus est, etiam ad 4° reposita ad breve tempus (utendum est intra 10 dies) condi potest. Artificem periti sumus.Plures in certificationibus crucialorum sui mercatus conciliandi pro Big demptis nullis Sinarum Maximum Sensum unum Gradum Probe Rt-Qpcr Kit V2, Qualitas vitae officinas est, Focus in emptoris postulatio fons est societatis superstitiae et progressionis, inhaeremus honestati et bonae fidei operandi habitus, adventum tuum exspecto!
Magnus discountingChina Taq DNA Polymerase, Qpcr, Societas Nostra pollicetur: rationabiles pretia, breves productionis tempus et post-venditio muneris satisfactoria, nos quoque gratam vobis officinam nostram visitare quovis tempore voles.Vtinam nunc nobis iucunda et longa negotia simul vocabula haberemus!!!

QuickEasyTM Cell Direct RT-qPCR Kit -Taqman

Cat.No.DRT-01021/01022

Ad cellulam directam RT-qPCR utens ≤ 1000,000 cellulis

Product introduction

Hoc productum utitur unica lysis quiddam systema ut cito RNA ab cultura exemplorum cellularum causa RT-qPCR aperiat motus, tempus consumens et laboriosum RNA purificationis processum eliminans, et tantum 7 minuta ad obtinendum requisitum RNA template, cum 5× Direct RT Mix, 2× Direct qPCR Mix-Taqman dummodo per ornamentum cito et efficaciter consequi possit tempus reale quantitatis.

5× Direct RT Mix et 2× Direct qPCR Mix-Taqman validam inhibitorem tolerantiam habere ac efficientem inversionem et specifica amplificationem efficere potest utens lysate exempli exempli mensurari pro exemplo.Reagens continet inversa transscriptae Foregenae, Hot D-Taq DNA Polymerase, dNTPs, MgCl₂, Reactio Buffer, PCR Optimizer et Stabilizer, quae adhiberi possunt cum lysis quiddam ad exempla cito ac facile deprehendere, et proprietates summae sensibilitatis, specificitatis et stabilitatis habet.

Product Features

Simplex, efficax Cell Direct RT technologia, quae minus quam 7 minuta sumit ut RNA exempla capiat.

Exemplaria exigentias parvas sunt, et minimum 10 cellularum excultarum experimentis adhiberi potest.

High throughput for rapid RNA acquirendi cellulas excultas ut 384, 96, 24, 12 et 6-plasmas bene.

DNA Eraser potest cito removere genomata dimissa, multum minuens ictum in experimentales eventus sequentes.

Optimized RT et qPCR systemata duo-gradus RT-PCR efficiunt cum transpositione efficaciore transpositione, specie, et fortiori RT-qPCR reactionem inhibitoris tolerantiae.

Ornamentum application

Scopus applicationis: Cellulae culturales.

Sample lysis RNA interpretatus est: tantum usus est ut duo gradus RT-qPCR templates.

Ornamenta adhiberi possunt ad sequentes fines: analyseos gene regulatoriae expressionis, allelae probatio, medicamentum protegendi, etc.

Ornamentum limitations

Ampliatis fragmentis ≤ 300 bp.

Ornamenta recenter culturae cellae adhibentur.

Product qualis imperium

Secundum Summam Qualitatis Management Systema praescientiae, singulae massae Cellae Direct RT-qPCR series kits multipliciter exacte probata est, ut fidem ac stabilitatem qualitatis cuiusque batch of kitis curaret.

Ornamentum contenta

*:Cell Lysis, 5× Direct RT Mix, 2× Direct qPCR Mix-Taqman separatim comparari potest, singula in Appendice 1 (PAGE 13).

Repono conditionibus

1. Shipping Conditions

Totum processum cistae vecturae gravis temperaturae glaciei colligendae, ut ornamentum in <4 °C statu sit.

2. at conditionibus

Copia pars I in 4°C et II ad -20°C.

Proteasus Plus II in 4°C reponenda, non constringitur -20°C.

Reagens 2× Direct qPCR Mix-Taqman reponitur sub -20°C, vel ad 4°C ad breve tempus, si frequenter adhibetur (infra 10 dies).

Ornamentum component notitia

Quiddam CL: Praebet environment requisita lysis profectae cellae.

Quiddam ST: activam substantiam in lysato terminat ad vitandum effectus in subsequentibus RT.

DNA Eraser: DNA removens effectum genome tollendi in experimentis subsequentibus.

5× Direct RT Mix: Continet altam RNA affinitatem inversa transscriptam, RNase Inhibitor, dNTPs, stabilimenta, amplificatores, optimizers, et primarii transpositionis transpositione ad alignment meliorem (Random Primer, Oligo(dT)₁₈Primae).

Protease plus II dimitte: In quiddam lysis contextu, cellulae acida nucleica dimittunt.

2× Direct qPCR Mix-Taqman: Hoc reagens continet Hot D-Taq DNA Polymerase, dNTPs, MgCl₂quiddam, PCR optimizer, ac stabilientem.

20× ROX Relatio Dye: Fere in Vera Tempus PCR amplificationis instrumentorum ABI, Stratagenae et aliorum societatum, adhibetur ad differentiam inter PCR fistulas et fistulas per errores PCR dosingorum causatorum accommodatas.De 20× ROX Relatio Concentratio inficienda pro diversis instrumentis requisita diversa est, et usor illud secundum intentionem instrumenti commendatam addere potest.

RNase-Free ddH₂O: RNase libero venenatis ultra aquam puram per duos gradus motus RT-qPCR.

Cautiones:(Vide cautiones diligenter legere antequam ornamentum utatur)

Operandi methodum experimenti attende ad evitandam crucis contaminationem inter exempla.

Munda munditia experimentalis ambitus et utensilia ad RNase contaminationem et RNA degradationem vitandam attende.

Specimina cellularum recentium vel bene conservatarum sume et numquam exempla cellulae dilapsae crebris congelatur.

5× Direct qPCR Mix,2× Direct qPCR Mix-Taqman debet vitare repetitum congelum- thaw, alioquin afficiet transpositionem contrariam et PCR efficientiam.

Prepaannonamanteoperatio

Vide diligenter diligenter legere antequam hoc ornamentum utatur.The Cell Direct RT-qPCR Ornamentum simplex, commodum et celeriter ad operandum, et instructiones integras informationes praebent de tota ornamentum et quomodo ea recte utatur.Quaeso parare necessarias materias et apparatum experimentalem ante usum.

Experimentalis materiae et armorum

Culturae cellae.

◆ 1.5 ml vel 2 ml, RNase-/DNase-tubus centrifugis Free, RNase-/DNase-Free tip, 0.2 ml tubus sterilis qPCR.

◆ qPCR machina, pipette, tabula centrifugium (≥13,400×g) (prout experimentis necessitatibus) etc.

salus

◆ Hoc productum est ad investigationes scientificas tantum propositas, quaeso ea non uti ad medicamenta pharmaceutica, orci, cibi et medicaminis.

Cum chemicis utentes, aptas vestes labrum induunt, chirothecas, specula tutelares, etc.

Operatioducibus

Cell Lysis systemata, RT systemata, et qPCR solutionis reactionis sarcinae sarcinae separatim comparari possunt, singula in Appendice 1 (PAGE 13).

Operatio dux

A: Sample RNA emissio

1.Cells pretreated sunt: ​​Lava cellulam culturae cum frigore PBS, deinde lyse cellas (10-10 .)⁶), 10⁶ quam cellularum copia commendatur Foregene the Cell an RNA Isolation Kit the Total (DE-03111) or Animal Total RNA Isolation Kit (DE-03011) pro RNA extractionis et purificationis.

1.1.Cellulae adhaerentes (24- lamminae exemplum bene)

6.1.1.Numerum cellularum in quovis bene determinando, numerum cellularum 1 10 . determinandum est⁵et fistulam adhibe ad medium culturae removendum e catino culturae.

6.1.2.Adde 200 µl praealtitae 1 PBS cuique bene.Saepe ne pipet, et PBS a puteis removeat.Hastiludio laminam et PBS quantum fieri potest removere.Perge ad gradum II.

6.1.3.Discus culturae cellae variae vel relatio numeri mensae 1-1 in catino culturae cellae addita praecoolescit 1 PBS pro cellula lavacro.

Table1-1: PBS dosis pro diversis numeris cellularum

Nota.Ut firma adhaerens amet.magnum numerum cellae detrimentum lavationis vitandum.

1.2.Suspensionis cellulae vel adherentes cellulae excultae in laminas non-porosas

1.2.1.Cellulae adhaerentes in non-multis bene lamellis excultis (suspensionis cellulae a proximo gradu 1.2.2) cellulas colligent et separant secundum normalem modum collectionis cellularum, easque in laminam culturam vel tubum centrifugium pone;si trypsinization adhibetur, centrifugationem requirit ad cellulas colligendas et ad trypsin residua removendum, addita PBS resuspendendo cellulas in singulas cellulas ut cellas discutiat.

1.2.2.Post numerum cellularum computatorum, cellulae aliquotatae 1×10⁵ unum ad tubi centrifugium, cellulas centrifugas in 1000 × g pro 10 min.

1.2.3.Adde 200 μl PBS ad tubum centrifugium, saepe ne pipet, et PBS directe aspirabit.pro- gressus ad 2. (Si difficilis ad praecipitandum et cellulae iterum resuspensae, peragi possunt 1000×g centrifugae 10 min, abiecta supernatante, globulo cellulae ad gradum pro- 2).

2.Cell lysis: Aufer Buffer CL, eius temperatura aequilibrata ad cella temperiem, DNA Eraser et Protease plus II exsistens, secundum sequentem tabulam 1-2 systema lysis parata: (solutio lysis ad usum parata).

Table1-2: synthesis systema praeparatio (Nota: in praeparatione glaciei)

3.(24 – lamina in exemplum ) Pipette 200 µl cellulae lysis magister in singula bene misce, identidem 5-10 vicibus flare, incubare ad cella temperiem (20-25 ℃ ) pro 5 min.

Nota.Ad formationem bullarum vitandam, quaeso, cum scala pipettingorum ad 200µl vel minus adaptata est.Cellae post Lysiam nubilosae apparent, quae normales sunt.

4.(24 – lamella exempli gratia) additur in liquore 20 μl Buffer ST (diversi systemata lysis Buffer ST in quantitate in Tabula 1-3 exhibita), repetita pipetting 5-10 temporum, in cella temperie (20-25 ℃) incubata pro 2 min.

Nota.Tubulus pipettus infra superficiem dispositus, ut lysata addita est.ad vitandum bullarum formationem, quaeso, cum scala fistulae pipetting ad 200µl vel minus adaptata est.

Tabula 1-3.Add Buffer ST

5. Lysata pro experimentis subsequentibus RT-qPCR adhibetur.Si experimenta subsequentia in tempore perfici non possunt, eam in glacie non plus quam 2hr custodiant, et ad -20℃ vel -80 condito (non plus quam tres menses).

B: RT ratio praeparationis

1. Eximito 5 × Direct RT Misce et pone in balneum glaciei, naturaliter liquefaciat et postea leniter misceat;RNase-Free ddH2O tolle et confla eum et in balneum glaciei postea usum pone.Para reactionem systema in glacie secundum Tabulam 2-1 infra.

Table 2-1: Praeparatio systematis RT reactionis

2. Post peractam formulationis systematis sensim mixti et centrifugerunt breviter in sequenti tabula 2 -2 condiciones reactionis RT reactionis.

Table 2-2: RT Reactio conditio occasus

3. Post completionem reactionis, productum reactionem in glaciem pro qPCR directe positum est, quaeso pone diuturnum tempus conservationis -20℃ vel -80℃.

Nota: Ob usum templates non-purificati, praecipitationes albae in altera transscriptione producti apparent.Hoc est commune phaenomenon.Centrifuge supernatantem statim ad experimenta sequentia.

Inde RT reactionis solutio ad proximum Gradum Real Time PCR reactionis systemata additur, commendatur addere amounts a 10-30% systematis reactionis.

C: qPCR reactionem ratio praeparationis

1. Appropriata moles B gradatim cDNA templates praeparata secundum tabulam sequentem 3-1 ad systema reactionem praeparandum.

Nota: quantitatem cDNA templates pro 10-30% rationum qPCR rationum.Exempli gratia, in 20μl qPCR systemate, 2-6 μl quiddam Lysis adde, sed non plus quam 6 µl.

2. Optimization bonae qPCR conditiones (Annealing temperaturaetc.) ad qPCR reactionem (Condiciones reactio in Tabula 3-2 data).

Nota: Conare condiciones optimized ad qPCR motus ut meliores proventus.

Tabula 3-1: Praeparatio PCR reactionis ratio

1*: Concentratio primario 50-900 nM componi potest cum primarius motus effectus pauper est.

Nota: Systema qPCR componi potest secundum necessitates experimentales et exemplar cycli fluorescens.Nam qPCR in 50μl ratio, dosis reagens proportionaliter adjust secundum XXμratio l.

2*: Elige congruentem intentionem finalem ROX Relationis Dye secundum fluorescentiam quantitatis cycli scelerisque.Aptissima ROX Reference Tinctura concentratione pro cyclis fluorescentiae communi quantitatis in tabula infra ostendetur:

Mensa 3-2: qPCR reactionis conditiones sunt provisum

Nota: Ad optimum qPCR effectum obtinendum, gradiens PCR adhiberi potest ad optimize reactionem condiciones pro diversis exemplaribus et diversis primariis.PCR reactionis conditiones variantur secundum fluorescens analysris, template, primario, etc. In specifica operatione, optimae reactionis conditiones necesse est designari secundum specificas conditiones fluorescentiae quantitatis cycli scelerisque, templates type, size of the fragment of interest, base sequence of the amplified fragment and GC content and length of firsters, including annealing temperature, reaction time, etc.

Real Time PCR primario design principia

Deinceps de primario et inversa primario

Nam Real Time PCR, primario consilio est ipsum.Primi se referunt ad proprietatem et efficientiam PCR amplificationis, et disponi possunt respectu sequentium principiorum:

◆ Primarius longitudo: 18-30bp.

GC content: 40-60%.

◆ Tim valorem: programmatio primario consilio, ut primarius 5, valorem primi primi dare potest.Valores Tim primarii fluminis et amni quam proxime fieri debent.Tm formula calculi adhiberi potest etiam: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Cum PCR faciendo, temperatura sub primario Tm valoris 5°C plerumque eligitur ut in furnum temperatus (pars aucta in furnum temperatura augere potest specificitatem PCR reactionis).

◆ Primers and PCR products:

Designatio primarum PCR amplificationis producti longitudinis potius 100-150bp.

Designatio primariorum in secundario ambitu structurae Formulae vitanda est quam maxime.

Vitare formationem 2 vel plures bases complementariae inter 3 fines fluminis et amni primariorum.

◆ Primarius 3′ basis terminalis adesse non potest cum 3 continuis G vel C additis.

Primarii ipsi structuras complementarias habere non possunt, alioquin derepta structura formabitur, per amplificationem afficiens.

ATCG in primo ordine quam aequaliter distribui debent, et vitanda est 3° basis terminalis, ut T.

Appendix1.Cell DirectRT-qPCR Ornamentum componensupplementum T Pack

1.Cell Lysis SOLUTIO